色谱级环己烷bv1946伟德收集了方法概要：在婴幼儿配方食品和乳粉中加入适量的脂酶，酶解后用NaOH 皂化，用正己烷萃取，蒸干后用正己烷溶解，用高效液相色谱柱后衍生法（HPLC-锌粉还原柱）用荧光检测器定量测定维生素K1。

关键词：婴幼儿配方食品，乳粉，HPLC，锌粉还原柱

方法步骤：

1、试剂和耗材

HPLC级正己烷；无水硫酸钠；

HPLC级甲醇；HPLC 级冰醋酸（乙酸）；HPLC级二氯甲烷；维生素K1 标准品。

2、提取

称取约2.5 g（精确到0.1mg）混合均匀的试样于三角瓶中（含淀粉的试样加入0.5g 淀粉酶），用30ml 温水溶解，加入1g 酯酶，于37℃恒温空气震荡器中震荡过夜，使其充分酶解。然后加入2ml 10mol/L氢氧化钠溶液，转移至500ml 的分液漏斗中，加入50ml 乙醇，充分混匀。再加入50ml 正己烷，加塞振摇2min，静置分层。放出下层于另一个500ml 分液漏斗中再次加入50ml 正己烷萃取，静置分层，弃去水相，合并正己烷。加入适量蒸馏水洗有机相两次，弃取水相，将正己烷通过无水硫酸钠过滤到500ml 的平底烧瓶中，在旋转蒸发器上40℃下蒸发至近干，用正己烷转移残留物到10ml 指形瓶中，用氮气吹干，准确加入1ml 正己烷，充分振荡溶解残留物，得到待测液，在冰箱中冷冻一小时后备用。

3、 HPLC 测定方法：

色谱柱、衍生柱：锌粉还原柱，35×4.6mm（LAAA-0001）

流动相：甲醇900ml，二氯甲烷100ml，冰醋酸0.3 ml，氯化锌1.5g，无水乙酸钠0.5g，溶解过0.45滤膜。

进样量：10 μL 

流 速：1.0 mL/min 

检测波长：荧光检测器：波长EX=243nm EM=430nm

4、结果分析：

分析图谱 

VK1 标准溶液色谱图（荧光检测器）0.4ug/ml VK1 标准溶液色谱图（荧光检测器）0.04ug/ml 

婴幼儿配方色谱图（荧光检测器） 

5、结果分析 

儿配方食品中的维生素K1，分离效果良好，峰形对称，重复性好。

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